假陰性判斷:造成假陰性結(jié)果的原因有很多,主要體現(xiàn)在FAM擴增曲線不起來,原因包括標(biāo)本抑制,核酸提取失敗,基因突變以及儀器故障等。
目前國內(nèi)主流PCR試劑都不帶內(nèi)標(biāo)監(jiān)控功能,用于檢測目標(biāo)基因的FAM擴增曲線既用來定量又用于定性(判斷陰陽性),因此FAM擴增曲線的好壞非常關(guān)鍵。對于此類無內(nèi)標(biāo)試劑,建議結(jié)合乙肝血清標(biāo)志物結(jié)果(五項定量/定性結(jié)果)來判斷陰陽性,即使是FAM曲線有擴增也應(yīng)該參考此結(jié)果,特別是E抗原結(jié)果。同時,對于擁有競爭性內(nèi)標(biāo)監(jiān)控功能的試劑來說,可有以下四種情況發(fā)生:如FAM無擴增,內(nèi)標(biāo)有擴增:結(jié)果正常,判斷該樣本為陰性結(jié)果;如FAM無擴增,內(nèi)標(biāo)也無擴增:結(jié)果異常,可能原因核酸提取失敗或有抑制,一定要重復(fù)實驗;如FAM有擴增,內(nèi)標(biāo)有擴增:結(jié)果正常,因為待測核酸和內(nèi)標(biāo)在同一反應(yīng)體系下擴增;如FAM有擴增,內(nèi)標(biāo)無擴增:結(jié)果正常,強陽性樣本會抑制內(nèi)標(biāo)的擴增,導(dǎo)致內(nèi)標(biāo)結(jié)果偏弱或陰性。
假陽性判斷(如何判定):臨床PCR檢測當(dāng)中造成假陽性結(jié)果的情況比較少,原因包括試劑污染,氣溶膠污染,操作污染,擴增產(chǎn)物污染,非特異性擴增,耗材污染等,所以建議一定要做陰性對照來監(jiān)控是否存在污染。
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